一．产品简介

CTCC自主研发的成脂诱导分化培养基，可体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞3T3-L1及原代人源或鼠源MSCs向成脂分化。该培养基包括促进3T3-L1细胞及MSCs细胞向成脂分化的基础培养基，优质质量胎牛血清，所需的培养基添加物以及青链霉素。

二．包装组成成分

三．成脂分化操作规程（以6孔板为例）：

1. 孔板包被：加适量0.1%明胶到培养器皿中，使其覆盖整个培养器皿的底面，在超净台或培养箱30min-2h，弃去明胶，待培养器皿晾干后，即可用于接种细胞。

2. 细胞的融合度达到80-90%时，即可使用0.25%胰酶消化收集。

3. 按2-5×10⁵cells/孔的细胞密度接种在六孔板中，每孔加入2mL细胞完全培养基，置于37℃，5%CO2的培养箱中进行培养。

4. （3T3-L1细胞）待融合度达到80%及以上，全量更换3T3-L1细胞完全培养基，继续培养72h。该步骤是为了使细胞保持接触抑制。弃液，每孔加入2mL37℃预热的成脂分化培养基A液；

（MSCs细胞）待融合度达到80%及以上，弃液，每孔加入2mL37℃预热的成脂分化培养基A液。

5. A液诱导2-3天后，吸弃A液，每孔加入2mL37℃预热的成脂诱导分化培养基B液，诱导2-3天。

6. A、B液交替诱导2-4次后，当观察到细胞内出现足够多的脂滴时，可继续用B液诱导3-7天，每2-3天换液一次。直至脂滴足量且大小合适时，即可结束诱导。

注意：

l 3T3-L1细胞正常培养时，推荐使用含10%NCS的DMEM完全培养基。融合度80%以上时，即建议传代，不可长时间保持接触抑制状态。

l 原代建议使用低代次的MSCs（<8代，MSCs随着传代后代次的增加，多向潜能也逐渐降低）

l 成脂诱导剂（尤其是Dex和IBMX）对细胞有一定的毒性或脱壁效应，铺板前务必进行包被，必要时可提高明胶包被浓度。

l 诱导液使用前应按量预热，避免整瓶诱导液反复冷热交替，造成成分失活。

l 换液时应动作轻柔。

l A液诱导期间，细胞出现形态变化为正常现象。

l A液、B液交替诱导时长可根据细胞状态灵活调节。如细胞状态好，耐受强，可延长A液的使用时长至4-7天，每48h换液一次，持续刺激脂滴形成。再更换B液诱导3-5天促进脂滴变大。