一．产品简介

CTCC自主研发的成肌诱导分化培养基（货号：CTCC-Y006），体外诱导MSCs细胞向成肌方向分化。该培养基包括促进MSCs向成肌方向分化的基础培养基，优质质量马血清，所需的培养基添加物以及青链霉素。

二．包装组成成分

三．培养器皿表面的明胶包被操作流程

为了避免诱导过程中MSCs出现漂浮现象，建议对成肌诱导使用的培养器皿表面进行明胶包被。

1. 加适量0.1%明胶到培养器皿中，能覆盖整个培养器皿底面的量即可。

2. 摇匀液体使其覆盖整个培养器皿的底面。

3. 将铺有0.1%明胶的培养器皿放置在超净台至少30min。

4. 30 min后弃去明胶，待培养器皿晾干后，即可用于接种细胞。

包被明胶的培养器皿在无菌和明胶不蒸干的条件下，可以在4℃保存两周。

四．成肌诱导分化操作规程（以24孔板为例）：

1. 原代的MSCs分离后，置于37℃，5%CO₂培养箱中培养，每2-3天换液或传代。

2. 建议使用低代次的MSCs（<8代，随着传代后代次的增加，多向潜能的能力也逐渐降低）。当细胞融合度达到60-80%时，用0.25%Trypsin-EDTA进行消化进行传代。

3. 收集细胞，按照5X10³cells/cm²的细胞密度接种在预先用明胶包被的孔板中，每孔培养基600μl，37℃，5%CO₂培养。

4. 待细胞融合度达到60-70%，开始诱导，小心弃去原有培养基，并小心沿壁加入37℃预热的成肌诱导分化培养基。

5. 每隔1天更换新鲜预热的成肌诱导分化培养基。

6. 在显微镜下观察细胞形态和生长状况。诱导分化成功时，可以看见肌管表现为厚的管状结构，有时为多核，可用吉姆萨染色验证是否有分化了的肌纤维。

为避免成肌诱导不成功或者分化效率低，请尽量保证MSCs纯度；不要将培养板长时间置于培养箱外观察或频繁开关培养箱；诱导培养基一定要预热；尽可能地避免晃动培养板；严格按照上述规程操作。